因業(yè)務(wù)調(diào)整，部分個(gè)人測(cè)試暫不接受委托，望見諒。

大腸桿菌檢測(cè)：方法與標(biāo)準(zhǔn)解析

簡介

大腸桿菌（Escherichia coli）是一種常見的腸道細(xì)菌，通常存在于人類和動(dòng)物的腸道中。雖然大多數(shù)大腸桿菌菌株無害，但某些致病性菌株（如O157:H7）可能引發(fā)嚴(yán)重的食源性疾病，表現(xiàn)為腹瀉、嘔吐甚至腎功能衰竭。此外，大腸桿菌作為衛(wèi)生指示菌，其在水體、食品和環(huán)境中的含量是衡量衛(wèi)生安全的重要指標(biāo)。因此，開展大腸桿菌檢測(cè)對(duì)保障食品安全、飲用水衛(wèi)生和公共衛(wèi)生安全具有重要意義。

檢測(cè)項(xiàng)目及簡介

大腸桿菌檢測(cè)通常包括以下幾類項(xiàng)目：

1. 菌落總數(shù)測(cè)定 通過培養(yǎng)法統(tǒng)計(jì)樣品中微生物的總量，間接反映衛(wèi)生狀況。
2. 大腸菌群檢測(cè) 檢測(cè)樣品中是否含有大腸菌群（包括大腸桿菌、克雷伯氏菌等），用于評(píng)估污染風(fēng)險(xiǎn)。
3. 耐熱大腸菌群（糞大腸菌群）檢測(cè) 這類菌群能在44.5℃下生長，其存在提示樣品可能受到糞便污染。
4. 大腸埃希氏菌（E. coli）特異性檢測(cè) 通過生化或分子生物學(xué)方法直接鑒定大腸桿菌，確定是否存在致病風(fēng)險(xiǎn)。

適用范圍

大腸桿菌檢測(cè)廣泛應(yīng)用于以下領(lǐng)域：

1. 食品行業(yè)
   • 乳制品、肉類、即食食品等需通過檢測(cè)確保無致病菌污染。
   • 食品加工環(huán)境的衛(wèi)生監(jiān)控（如設(shè)備表面、操作臺(tái)）。
2. 飲用水安全
   • 自來水、瓶裝水、水源地水質(zhì)的衛(wèi)生評(píng)估。
3. 醫(yī)療與公共衛(wèi)生
   • 醫(yī)院環(huán)境監(jiān)測(cè)（如手術(shù)室、器械表面）以防止院內(nèi)感染。
4. 環(huán)境監(jiān)測(cè)
   • 污水排放、河流、土壤等環(huán)境樣本的污染評(píng)估。

檢測(cè)參考標(biāo)準(zhǔn)

國內(nèi)外針對(duì)大腸桿菌檢測(cè)制定了多項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)，主要包括：

1. GB 4789.3-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)》 中國國家標(biāo)準(zhǔn)，適用于食品中大腸菌群的定量檢測(cè)。
2. GB/T 5750.12-2023《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 微生物指標(biāo)》 規(guī)定飲用水中大腸菌群和大腸桿菌的檢測(cè)方法。
3. ISO 16649-2:2001《食品和動(dòng)物飼料的微生物學(xué) 大腸桿菌β-葡萄糖醛酸酶檢測(cè)方法》 國際標(biāo)準(zhǔn)化組織制定的酶底物法檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。
4. US FDA BAM Chapter 4《Bacteriological Analytical Manual: Enumeration of Escherichia coli and the Coliform Bacteria》 美國食品藥品監(jiān)督管理局推薦的檢測(cè)流程，涵蓋傳統(tǒng)培養(yǎng)法與快速檢測(cè)技術(shù)。

檢測(cè)方法及相關(guān)儀器

1. 傳統(tǒng)培養(yǎng)法

原理：通過選擇性培養(yǎng)基分離目標(biāo)菌，結(jié)合生化試驗(yàn)鑒定。

• 步驟：
  • 初發(fā)酵：將樣品接種于乳糖發(fā)酵管，37℃培養(yǎng)24小時(shí)，產(chǎn)酸產(chǎn)氣者為陽性。
  • 分離培養(yǎng)：陽性樣品劃線接種于伊紅美藍(lán)（EMB）培養(yǎng)基，觀察典型菌落。
  • 證實(shí)試驗(yàn)：對(duì)可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色、吲哚試驗(yàn)等進(jìn)一步確認(rèn)。
• 儀器：恒溫培養(yǎng)箱、顯微鏡、高壓滅菌鍋。

2. 快速檢測(cè)法

酶底物法（如Colilert技術(shù)）

• 原理：利用大腸桿菌特異性酶（β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖醛酸酶）分解底物產(chǎn)生熒光或顯色反應(yīng)。
• 步驟：將樣品與試劑混合，37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)，通過熒光強(qiáng)度判斷結(jié)果。
• 儀器：紫外燈或酶標(biāo)儀。

免疫學(xué)方法（如ELISA）

• 原理：利用抗體與目標(biāo)抗原（如O157:H7）的特異性結(jié)合，通過酶標(biāo)二抗顯色。
• 儀器：酶標(biāo)儀、洗板機(jī)。

3. 分子生物學(xué)方法

PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）

• 原理：擴(kuò)增大腸桿菌特異性基因片段（如uidA、stx）。
• 步驟：提取DNA→設(shè)計(jì)引物→擴(kuò)增→電泳檢測(cè)。
• 儀器：PCR儀、電泳系統(tǒng)。

qPCR（實(shí)時(shí)熒光定量PCR）

• 原理：通過熒光探針實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過程，實(shí)現(xiàn)定量分析。
• 儀器：熒光定量PCR儀。

總結(jié)

大腸桿菌檢測(cè)是保障食品安全和公共衛(wèi)生的核心環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)培養(yǎng)法成本低但耗時(shí)長，適用于常規(guī)篩查；快速檢測(cè)法和分子生物學(xué)技術(shù)則顯著提升了檢測(cè)效率，適合應(yīng)急監(jiān)測(cè)和高通量分析。隨著技術(shù)發(fā)展，自動(dòng)化設(shè)備（如全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)）的應(yīng)用進(jìn)一步提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性和標(biāo)準(zhǔn)化水平。未來，基于基因測(cè)序和生物傳感器的檢測(cè)技術(shù)有望成為新的研究方向，為大腸桿菌監(jiān)測(cè)提供更高效的解決方案。